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PCR儀，細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，熒光計(jì)，紫外分光光度計(jì)，離心機(jī)，電泳儀電泳槽，化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)，移液器，顯微鏡，醫(yī)用藥品冷藏箱
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Bio-Rad伯樂CFX Opus96實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)，您在選擇染料時(shí)需要了解該儀器的核心特性。核心結(jié)論：CFX Opus96是一款支持多種檢測(cè)通道的實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，因此它兼容市面上絕大多數(shù)常見的qPCR染料和探針。您可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，從以下幾類染料中進(jìn)行選擇：
一、伯樂CFX Opus96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀通用型DNA結(jié)合染料
這類染料可以與任何雙鏈DNA分子結(jié)合并發(fā)出熒光，適用于大多數(shù)基礎(chǔ)的基因表達(dá)分析（RT-qPCR）和基因分型實(shí)驗(yàn)
1、特點(diǎn)：
成本低： 按反應(yīng)次數(shù)計(jì)算，比探針法便宜很多。
使用簡便： 只需在設(shè)計(jì)引物時(shí)確保擴(kuò)增產(chǎn)物單一、特異即可。
通用性強(qiáng)： 一套染料可用于所有基因的檢測(cè)。
2、常見選擇：
SYBR Green I： 經(jīng)典、常用的qPCR染料，靈敏度高。
EvaGreen： 穩(wěn)定性比SYBR Green更好，在高濃度時(shí)抑制PCR效應(yīng)的程度更低，尤其適合進(jìn)行高分辨率熔解曲線分析。
BioRad自家的CFX Manager軟件中也預(yù)置了這些染料的檢測(cè)方案。
注意事項(xiàng)：
由于它會(huì)與所有雙鏈DNA（包括引物二聚體和非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物）結(jié)合，因此對(duì)引物的特異性和PCR反應(yīng)條件要求較高。數(shù)據(jù)分析時(shí)，必須進(jìn)行熔解曲線分析，以確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性。
二、伯樂CFX Opus96實(shí)時(shí)熒光定量PCR序列特異性探針
這類染料通過一個(gè)與目標(biāo)序列特異性結(jié)合的寡核苷酸探針來發(fā)光，特異性高。
1、特點(diǎn)：
特異性強(qiáng)： 只有存在目標(biāo)序列時(shí)才會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)，有效避免了引物二聚體等的干擾。
可進(jìn)行多重檢測(cè)： 使用不同熒光標(biāo)記的探針，可以在一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶基因。
成本較高： 需要為每個(gè)檢測(cè)靶點(diǎn)合成特定的探針。
2、常見選擇：
TaqMan 探針： 最主流的探針技術(shù)，CFX Opus96兼容。它采用FRET原理，探針一端標(biāo)記報(bào)告熒光基團(tuán)（如FAM, HEX, VIC, CY5等），另一端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
分子信標(biāo)： 另一種形式的探針，發(fā)夾結(jié)構(gòu)，特異性也很好。
FRET 探針： 使用兩條相鄰的探針，常用于羅氏LightCycler系統(tǒng)，但CFX Opus96同樣可以檢測(cè)。
關(guān)鍵點(diǎn)：
選擇探針法時(shí)，您需要確認(rèn)探針上所標(biāo)記的熒光基團(tuán)的激發(fā)/發(fā)射光譜是否在CFX Opus96的檢測(cè)通道內(nèi)。幸運(yùn)的是，CFX Opus96的濾光片組非常標(biāo)準(zhǔn)，支持FAM, HEX, VIC, ROX, Texas Red, CY5等常見熒光基團(tuán)。
3、其他新型染料
一些為特殊應(yīng)用開發(fā)的染料也可以在CFX Opus96上使用。
HRM染料： 如LCGreen、SYTO 9等，專門用于高分辨率熔解曲線分析，進(jìn)行SNP分型、突變掃描和甲基化分析。CFX Opus96是進(jìn)行HRM分析的優(yōu)秀平臺(tái)。
雙標(biāo)記探針： 除了TaqMan，還有許多其他廠商提供的類似原理的雙標(biāo)記探針。
三、總結(jié)與選擇建議
1、對(duì)于絕大多數(shù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)（如檢測(cè)某幾個(gè)基因的表達(dá)量）： 從 SYBR Green I 或 EvaGreen 開始。且CFX Opus96對(duì)其有支持。
2、當(dāng)實(shí)驗(yàn)對(duì)特異性要求高，或者需要在一個(gè)孔里檢測(cè)多個(gè)基因時(shí)： 選擇 TaqMan 探針法。您可以從各大生物公司（如Thermo Fisher, IDT, 等）訂購針對(duì)您目標(biāo)基因的探針。
3、如果需要做SNP分型或突變檢測(cè)： 選擇 EvaGreen 或其他專用的 HRM染料，并利用CFX Opus96的HRM功能。
