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技術(shù)文章賽默飛7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是一款在高校生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)等研究領(lǐng)域中應(yīng)用非常廣泛的核心設(shè)備。它本身是一個(gè)功能強(qiáng)大的“檢測(cè)平臺(tái)",能夠執(zhí)行的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目取決于您設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)和使用的試劑。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),只要實(shí)驗(yàn)的最終目的是對(duì)特定核酸(DNA或cDNA)進(jìn)行精確定量和檢測(cè),都可以使用7500來(lái)實(shí)現(xiàn)。以下是它在高校中常見(jiàn)的、具體的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目分類(lèi)和舉例:
一、賽默飛7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR核心應(yīng)用領(lǐng)域
1、基因表達(dá)分析
這是qPCR經(jīng)典、廣泛的應(yīng)用。通過(guò)檢測(cè)樣品中特定基因的mRNA水平(經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA),來(lái)研究基因在何種條件下、何種組織中表達(dá)。
研究案例:
醫(yī)學(xué)/生物學(xué): 研究某種藥物處理細(xì)胞后,癌基因(如p53)或炎癥因子(如IL-6, TNF-α)的表達(dá)變化。
植物學(xué): 研究植物在干旱、鹽堿脅迫下,相關(guān)抗逆基因的表達(dá)模式。
發(fā)育生物學(xué): 分析不同胚胎發(fā)育階段關(guān)鍵調(diào)控基因的表達(dá)量差異。
2、微生物檢測(cè)與鑒定
利用物種特異性的引物探針,對(duì)微生物進(jìn)行定性和定量分析。
研究案例:
環(huán)境科學(xué): 檢測(cè)水體或土壤中特定功能微生物(如硝化細(xì)菌、降解石油的細(xì)菌)的豐度。
食品科學(xué): 快速檢測(cè)食品中的致病菌,如沙門(mén)氏菌、李斯特菌。
醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究: 分析腸道微生物群落中某種特定菌群的比例變化。
3、在轉(zhuǎn)基因作物或動(dòng)物的研究中,用于確認(rèn)外源基因是否成功整合并進(jìn)行表達(dá)。
研究案例:
農(nóng)學(xué): 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因大豆、玉米中特定外源基因(如抗蟲(chóng)Bt基因)的拷貝數(shù)和表達(dá)水平。
生物技術(shù): 在構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠模型后,鑒定其基因型。
4、微小RNA(miRNA)表達(dá)分析
miRNA是重要的基因調(diào)控因子。由于其片段短,需要特殊設(shè)計(jì)的莖環(huán)法引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和檢測(cè),qPCR是研究其表達(dá)的金標(biāo)準(zhǔn)方法。
研究案例:
癌癥研究: 分析腫瘤組織中特定的致癌或抑癌miRNA(如miR-21, let-7家族)的表達(dá)水平,作為潛在的生物標(biāo)志物。
5、病毒載量定量
精確測(cè)定患者血清或細(xì)胞培養(yǎng)物中病毒的拷貝數(shù),是病毒學(xué)研究和新藥評(píng)估的關(guān)鍵。
研究案例:
醫(yī)學(xué)/病毒學(xué): 研究抗病物對(duì)乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)或單純皰疹病毒(HSV)復(fù)制的影響。
二、7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)類(lèi)型
在7500上,這些應(yīng)用通常通過(guò)以下幾種技術(shù)模式實(shí)現(xiàn):
1、SYBR Green染料法:
原理: 染料非特異性地嵌入雙鏈DNA,發(fā)出熒光。
優(yōu)點(diǎn): 成本低,使用方便。
缺點(diǎn): 特異性稍差,容易受非特異性擴(kuò)增和引物二聚體影響。
適用項(xiàng)目: 快速的基因表達(dá)篩查、基因型鑒定(配合熔解曲線分析)。
2、TaqMan探針?lè)ǎ?/span>
原理: 使用一個(gè)序列特異性的熒光探針,特異性高,準(zhǔn)確性好。
優(yōu)點(diǎn): 特異性高,適合多重PCR。
缺點(diǎn): 探針合成成本較高。
適用項(xiàng)目: SNP分型、病原體定量、多重基因表達(dá)分析。
三、總結(jié)
總而言之,賽默飛7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在高校實(shí)驗(yàn)室中是一個(gè)通用型核酸定量工具。它可以服務(wù)于:
1、基礎(chǔ)生物學(xué)研究(基因功能、信號(hào)通路)
2、醫(yī)學(xué)研究(疾病機(jī)制、生物標(biāo)志物、藥物靶點(diǎn))
3、農(nóng)學(xué)研究(作物育種、抗逆機(jī)理)
4、環(huán)境科學(xué)研究(微生物生態(tài))
5、食品科學(xué)(安全檢測(cè))
最終決定它能檢測(cè)什么項(xiàng)目的,是您的研究課題、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和所使用的引物/探針。 在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前,請(qǐng)務(wù)必查閱相關(guān)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)方案,并完成引物探針的優(yōu)化與驗(yàn)證。