QuantStudio 3 在設(shè)計(jì)上能夠進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的實(shí)驗(yàn)，例如在運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)96孔板時(shí)，一個(gè)典型的qPCR程序本身就需要1.5到2.5小時(shí)。儀器本身具備連續(xù)運(yùn)行24小時(shí)甚至更久的硬件能力。

然而，能否順利實(shí)現(xiàn)24小時(shí)連續(xù)運(yùn)行，關(guān)鍵在于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣品和試劑穩(wěn)定性以及無(wú)人值守的風(fēng)險(xiǎn)管理。以下是詳細(xì)的解釋和注意事項(xiàng)：

一、支持24小時(shí)運(yùn)行的理由

1、硬件設(shè)計(jì)：儀器的加熱塊、光學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)和控制軟件都支持長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行。您可以輕松設(shè)置一個(gè)循環(huán)數(shù)多、退火/延伸時(shí)間長(zhǎng)的程序，總時(shí)長(zhǎng)超過24小時(shí)。

2、軟件支持：QuantStudio Design and Analysis 軟件允許您設(shè)置并運(yùn)行長(zhǎng)達(dá)數(shù)天的實(shí)驗(yàn)程序。

二、實(shí)現(xiàn)24小時(shí)連續(xù)運(yùn)行的關(guān)鍵前提與注意事項(xiàng)

1、反應(yīng)體系蒸發(fā)問題（最關(guān)鍵?。?/span>

必須使用光學(xué)蓋膜或封板膜：不能直接使用普通的板蓋。需要使用專門的熱封膜（如 MicroAmp™ Optical Sealing Film）或光學(xué)透明的粘性封板膜，并用相應(yīng)的封板器將其緊密密封，防止在長(zhǎng)時(shí)間高溫循環(huán)中液體蒸發(fā)，導(dǎo)致反應(yīng)失敗和儀器污染。

驗(yàn)證密封性：確保封膜沒有褶皺或未封緊的區(qū)域。

2、試劑和酶的穩(wěn)定性

使用長(zhǎng)效酶：普通的Taq酶在長(zhǎng)時(shí)間高溫循環(huán)下可能會(huì)失活。如果您計(jì)劃運(yùn)行一個(gè)非常長(zhǎng)的程序（例如超過3-4小時(shí)），強(qiáng)烈建議使用為“長(zhǎng)片段PCR"或“長(zhǎng)時(shí)間擴(kuò)增"設(shè)計(jì)的特殊酶 mix，這些酶具有更好的熱穩(wěn)定性。

Mix的穩(wěn)定性：確保您使用的預(yù)混液（Master Mix）制造商沒有標(biāo)明不適用于超長(zhǎng)運(yùn)行時(shí)間。

3、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的合理性

循環(huán)數(shù)：通常40個(gè)循環(huán)已經(jīng)足夠檢測(cè)絕大多數(shù)模板。設(shè)置過高的循環(huán)數(shù)（如60-80循環(huán)）不僅不必要，還可能增加背景噪音和蒸發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。請(qǐng)根據(jù)您的模板濃度合理設(shè)置循環(huán)數(shù)。

程序步驟時(shí)間：延長(zhǎng)退火/延伸時(shí)間會(huì)增加總運(yùn)行時(shí)間。請(qǐng)確認(rèn)您的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度是否需要這么長(zhǎng)的延伸時(shí)間。

4、無(wú)人值守的風(fēng)險(xiǎn)

電力保障：確保實(shí)驗(yàn)室供電穩(wěn)定，有UPS（不間斷電源）支持，防止意外斷電導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中斷和數(shù)據(jù)丟失。

儀器狀態(tài)：在離開前，確認(rèn)儀器運(yùn)行正常，沒有報(bào)錯(cuò)信息。

環(huán)境溫度：確保儀器周圍通風(fēng)良好，環(huán)境溫度不會(huì)過高。

三、總結(jié)與建議

1、可以做到：QuantStudio 3 在技術(shù)上能夠單次連續(xù)運(yùn)行24小時(shí)。

2、不推薦常規(guī)化：除非有特殊實(shí)驗(yàn)需求（如使用特殊的長(zhǎng)片段酶），否則不建議常規(guī)設(shè)計(jì)單次長(zhǎng)達(dá)24小時(shí)的qPCR程序。更好的做法是優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案，縮短運(yùn)行時(shí)間，或采用分批上樣的間歇式運(yùn)行。

3、如果必須進(jìn)行：

嚴(yán)格密封：使用高質(zhì)量的光學(xué)密封膜和封板器。

選擇穩(wěn)定試劑：確認(rèn)并使用熱穩(wěn)定性更高的酶。

進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)：先用少量樣本進(jìn)行一次長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)行的預(yù)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證擴(kuò)增效率和結(jié)果是否可接受。

做好風(fēng)險(xiǎn)管理：確保電力穩(wěn)定，并告知實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員。

4、總而言之，將QuantStudio 3用于24小時(shí)連續(xù)運(yùn)行在技術(shù)上是可行的，但成功與否高度依賴于您對(duì)蒸發(fā)控制和試劑穩(wěn)定性的管理。 在嘗試之前，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)評(píng)估這些風(fēng)險(xiǎn)。