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怎么選購(gòu)BioRad伯樂(lè)電穿孔系統(tǒng)電極杯?

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電極杯是電穿孔實(shí)驗(yàn)中的核心耗材,其選擇直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。選購(gòu)時(shí),您需要依次考慮以下四個(gè)關(guān)鍵因素:


一、選購(gòu)伯樂(lè)電極被核心要素

電極杯兩極之間的精確距離(以毫米計(jì))決定了電擊時(shí)產(chǎn)生的電場(chǎng)強(qiáng)度(E, V/cm)。電場(chǎng)強(qiáng)度(E) = 電壓(V) / 間隙(cm)。因此,間隙是選擇電極杯最關(guān)鍵的參數(shù),它必須與您的實(shí)驗(yàn) protocol 和細(xì)胞類(lèi)型相匹配。


二、常見(jiàn)間隙及適用場(chǎng)景

1、間隙大?。? mm

適用細(xì)胞類(lèi)型:細(xì)菌、酵母、部分懸浮哺乳動(dòng)物細(xì)胞

特點(diǎn)及應(yīng)用:常用。適用于大多數(shù)細(xì)菌轉(zhuǎn)化(如大腸桿菌),所需電壓較低。

2、間隙大?。? mm

哺乳動(dòng)物細(xì)胞(貼壁或懸?。?、植物原生質(zhì)體

非常常用。適用于多種真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染,提供了電場(chǎng)強(qiáng)度和細(xì)胞存活率之間較好的平衡。

3、間隙大?。? mm

非常脆弱的細(xì)胞,如植物原生質(zhì)體、某些昆蟲(chóng)細(xì)胞

需要較低電場(chǎng)強(qiáng)度時(shí)使用。所需電壓較高,但電流較小,熱效應(yīng)較低。

簡(jiǎn)單總結(jié):小間隙(如1mm)用于小細(xì)胞(細(xì)菌)和高電場(chǎng)強(qiáng)度;大間隙(如2mm, 4mm)用于大而脆弱的細(xì)胞和較低電場(chǎng)強(qiáng)度。


三、材質(zhì)與工藝 - 影響實(shí)驗(yàn)一致性和安全性

1、電極材質(zhì):伯樂(lè)的電極杯通常采用高純度的鋁電極。鋁能提供優(yōu)異的導(dǎo)電性和一致的電場(chǎng)分布,是標(biāo)準(zhǔn)選擇。確保電極光滑、無(wú)劃痕。

2、杯體材質(zhì):通常為無(wú)菌、生物清潔級(jí)的透明聚苯乙烯,便于觀察樣品。

3、工藝質(zhì)量:選擇無(wú)縫一體成型的杯體。有縫的廉價(jià)替代品容易在電擊時(shí)發(fā)生泄漏或電弧放電,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗甚至損壞電穿孔儀。


四、如何根據(jù)您的系統(tǒng)和實(shí)驗(yàn)進(jìn)行選擇

1、確認(rèn)您的電穿孔儀型號(hào):

伯樂(lè)常見(jiàn)的電穿孔系統(tǒng)如 Gene Pulser Xcell、MicroPulser、Gene Pulser II 等,都使用標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的電極杯(長(zhǎng)寬高一致)。您主要需要選對(duì)間隙,而無(wú)需擔(dān)心兼容性問(wèn)題。這些儀器的電極槽設(shè)計(jì)就是為這種標(biāo)準(zhǔn)杯服務(wù)的。

2、參考已有Protocol:

如果您是重復(fù)經(jīng)典實(shí)驗(yàn)(如大腸桿菌DH5α的轉(zhuǎn)化),文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)室的既定protocol中會(huì)直接指定使用 1 mm 間隙的電極杯。

如果是轉(zhuǎn)染一種新細(xì)胞,首先查閱文獻(xiàn)中類(lèi)似細(xì)胞使用的參數(shù)(電壓、電容、電阻)和電極杯間隙。伯樂(lè)也提供了大量針對(duì)不同細(xì)胞類(lèi)型的推薦protocol。

3、進(jìn)行條件優(yōu)化:

如果找不到參考,您需要進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。通常的方法是固定脈沖時(shí)間(或電容/電阻)和DNA用量,使用同一間隙(如2mm)的電極杯,在不同電壓下進(jìn)行測(cè)試,找到轉(zhuǎn)換效率高且細(xì)胞死亡率低的“甜蜜點(diǎn)"。


五、選購(gòu)總結(jié)與清單

在購(gòu)買(mǎi)前,請(qǐng)核對(duì)以下清單:

間隙(Gap):我的實(shí)驗(yàn)對(duì)象需要____ mm的電極杯?(細(xì)菌選1mm,哺乳動(dòng)物細(xì)胞常用2mm)

無(wú)菌性:我的實(shí)驗(yàn)需要無(wú)菌包裝嗎?(是/否)

酶潔度:我的核酸樣品需要無(wú)DNase/RNase認(rèn)證嗎?(是/否)

包裝數(shù)量:我需要單支包裝還是多支包裝?

品牌與質(zhì)量:我是否選擇伯樂(lè)原廠或口碑好的高質(zhì)量兼容品牌以確保結(jié)果一致性和可靠性?(強(qiáng)烈建議初學(xué)者和重要實(shí)驗(yàn)使用原廠產(chǎn)品)

TEL:18016231680

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