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Qubit 4.0熒光定量技術(shù)是賽默飛世爾（Thermo Fisher Scientific）推出的一種高靈敏度、高特異性的核酸（DNA/RNA）或蛋白質(zhì)定量方法，基于熒光染料與目標(biāo)分子特異性結(jié)合的原理，通過檢測熒光信號來精確計算濃度。以下是其核心特點和工作原理的詳解：
一、賽默飛qubit4.0熒光計核心特點
1、高靈敏度：可檢測低至0.05 ng/μL的DNA或RNA（比紫外分光光度法如NanoDrop靈敏1000倍）。
2、高特異性：熒光染料僅結(jié)合目標(biāo)分子（如雙鏈DNA、單鏈DNA或RNA），避免污染物（如鹽、蛋白、游離核苷酸）干擾。
3、寬動態(tài)范圍：無需稀釋即可覆蓋多個數(shù)量級（如DNA檢測范圍0.05–100 ng/μL）。
4、快速操作：僅需1–2 μL樣本，2–3分鐘完成檢測。
5、自動化校準(zhǔn)：內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)曲線，儀器自動計算濃度。
二、賽默飛qubit4.0熒光計操作流程
1、配制工作液：將熒光染料與緩沖液按比例混合。
2、加樣：將工作液與樣本加入專用Qubit檢測管。
3、孵育：室溫靜置2–5分鐘（使染料充分結(jié)合）。
4、上機檢測：將檢測管放入Qubit 4.0，選擇對應(yīng)檢測程序（如“dsDNA HS"）。
5、讀取結(jié)果：儀器直接顯示濃度（ng/μL）和樣本總量（ng）。
三、賽默飛qubit4.0適用樣本類型
1、核酸：雙鏈DNA（dsDNA）、單鏈DNA（ssDNA）、RNA、microRNA。
2、蛋白：使用專用蛋白檢測試劑盒（如Qubit Protein Assay Kit）。
3、兼容樣本：純化后的DNA/RNA（如來自試劑盒、凝膠回收產(chǎn)物）、細胞裂解液（需避免高濃度去垢劑干擾）。
四、注意事項
1、染料選擇：根據(jù)樣本類型選擇對應(yīng)試劑盒（如高靈敏度dsDNA HS或廣范圍dsDNA BR）。
2、避免污染：使用無核酸酶耗材，操作時戴手套。
3、樣本要求：pH需中性（避免沖突pH值影響染料結(jié)合）。
4、儀器校準(zhǔn)：定期使用標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)（尤其更換試劑批次時）。
